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English

Easy Cloning T-vector (pEC-T)(規(guī)格:20次×5 | 貨號(hào):HKT003-01B)

英文名稱:Easy Cloning T-vector (pEC-T)

貨 號(hào) :HKT003-01B

規(guī) 格 :20次

用途:專用 T載體

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產(chǎn)品名稱:Easy Cloning T-vector (pEC-T)

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格:

編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品介紹價(jià)格
HKT003-01BEasy Cloning T-vector (pEC-T)20次×5T載體2398

產(chǎn)品描述:
      Easy Cloning T-vector是一種PCR 產(chǎn)物高效TA克隆的專用 T載體。它由pBluescript II KS 載體改造而成:保留了pBluescript II KS 載體全部的酶切位點(diǎn);PCR 產(chǎn)物插入位點(diǎn)處于多克隆酶 切位點(diǎn)的中間,其兩側(cè)都有眾多的酶切位點(diǎn)可供選擇。
      由于本載體以 pBluescript II KS 載體為基礎(chǔ)構(gòu)建而成,所以 它具有同pBluescript II KS 載體相同的功能:PCR 產(chǎn)物插入后可 以利用α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,挑選陽性克隆??梢杂?M13 通用引物和T7,T3 啟動(dòng)子引物對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。含有 T7 及T3RNA 聚合酶的啟動(dòng)子,可以對(duì)插入片段進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。

Easy Cloning T-vector (pEC-T) 產(chǎn)品包裝(A包裝):

Easy Cloning T-vector (pEC-T) 產(chǎn)品包裝(A包裝)

操作方法:
      1) 選擇合適的連接體系(詳細(xì)介紹見背面)。 
      2) 取10 μL 加入至 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,用移 液槍吹打混合,冰上放置30 分鐘。 
      3) 將離心管置于 42℃水浴中,熱激 60-90 秒,迅 速將離心管置于冰上,放置 2-3 分鐘。 
      4) 向每個(gè)離心管中加入 500μL 無菌不含抗生素的 LB 或SOC 培養(yǎng)基中,37℃搖床,150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘,使質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
      5) 吸取200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含氨芐 青霉素的 LB 或SOC 固體平板上,用無菌涂布棒將細(xì) 胞均勻涂開,將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全 吸收,倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。  
      6) PCR檢測(cè),利用試劑盒自帶的高速PCR擴(kuò)增試 劑2×FastTaq Mast Mix直接進(jìn)行菌落PCR鑒定。

pEC-T結(jié)構(gòu)圖

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