菌落總數(shù)測定結果誤差大？原因都在這里↓↓↓
發(fā)布時間：2022-11-30 瀏覽次數(shù)：3205
在食品微生物檢驗過程中，測定菌落的總數(shù)可以分析菌落的繁殖和生長情況。隨著食品安全問題的突出，檢測結果準確無誤也是確保食品安全的基石。但是，在食品菌落總數(shù)檢測中數(shù)據(jù)不準確的現(xiàn)象時有發(fā)生，問題主要出在哪里呢？
菌落總數(shù)在我國大量產(chǎn)品標準中有明確的限量規(guī)定，其中在GB 4789.2-2016《食品安全國家 標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定》（以下簡稱GB4789.2）中就規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的具體流程。
1 培養(yǎng)基溫度對菌落總數(shù)計數(shù)結果的影響
細菌培養(yǎng)用瓊脂的凝點通常為32~39℃。GB 4789.2中規(guī)定，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基需冷卻至46±1℃時才能用于傾注計數(shù)，該溫度與其他國家標準的規(guī)定存在細微的差異，就比如美國FDABAM規(guī)定傾注時PCA瓊脂溫度為45±1℃。
在實際工作中，由于實驗人員操作速度、培養(yǎng)基原料差異等因素影響，即使在水浴鍋中冷卻至46±1℃的培養(yǎng)基在具體實驗過程中時常會出現(xiàn)部分凝固現(xiàn)象。因此，在具體檢驗工作中培養(yǎng)基溫度的控制提供了較寬的安全范圍，可行性值得進一步深入探討。
2 操作時間對菌落總數(shù)計數(shù)結果的影響
為了保證技術結果能準確反映樣品的污染狀態(tài)，GB4789.2中指定使用的樣品稀釋液為不含糖源和氮源的磷酸鹽緩沖液或生理鹽水，通常認為細菌在這2種溶液中的數(shù)量短時間內不會發(fā)生顯著性變化，而且在GB 4789.2未對從樣品前處理到瓊脂傾注完成的時間給出明確規(guī)定。
但是在食品樣品中時常含有豐富的營養(yǎng)物質，當與磷酸鹽緩沖液或生理鹽水混合后會給微生物提供良好的生長環(huán)境。為防止菌落數(shù)在檢驗過程中發(fā)生顯著性變化，美國FDABAM中規(guī)定從樣品原始稀釋到傾注過程應在15min內完成。
因此，也在提示GB4789.2方法中應對從樣品前處理到瓊脂傾注成的時間給出明確規(guī)定，以防止因檢驗過程造成的菌落計數(shù)結果顯著性差異。
3 傾注體積對菌落總數(shù)計數(shù)結果的影響
PCA培養(yǎng)基是菌落總數(shù)計數(shù)方法的關鍵要素，在不同標準中的使用體積存在明顯差異。GB4789.2中規(guī)定PCA培養(yǎng)基在每個直徑為90mm的平皿中傾注體積為15～20mL，而美國FDABAM中規(guī)定PCA培養(yǎng)基的傾注體積為12～15mL/平皿。理論上，雖然PCA培養(yǎng)基使用量的增加會增加單位面積培養(yǎng)基的厚度，可對在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的蒸發(fā)現(xiàn)象起到良好的緩沖作用。
據(jù)實驗研究顯示12~20mL/平皿的培養(yǎng)基使用體積變化不會對測試菌種的計數(shù)結果產(chǎn)生顯著性影響，這一結果為實驗室培養(yǎng)基耗材的節(jié)省提供了良好的數(shù)據(jù)支持。
4 培養(yǎng)基品牌對菌落總數(shù)計數(shù)結果的影響
目前，我國GB4789.28中針對PCA培養(yǎng)基評價用的參考物質為TSA培養(yǎng)基，與其相比，只要3個標準菌種的生長率大于70％即為符合要求，但是通過實驗選用不同品牌的培養(yǎng)基計數(shù)結果間也出現(xiàn)了顯著性差異。
但是在GB4789系列標準中缺乏明確的質量要求，致使不同生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)各自能力來選擇、使用該類原料，導致培養(yǎng)基質量出現(xiàn)了一定差異。因此，我國急需研制規(guī)范的培養(yǎng)基參考物質和評價方法，對PCA培養(yǎng)基的質量進行規(guī)范。
鑒于菌落總數(shù)計數(shù)結果為評判食品質量是否合格的定量指標，其檢測計數(shù)使用的方式方法也很同等重要。
傳統(tǒng)的人工肉眼計數(shù)，不僅耗費人力和時間，而且采用肉眼觀測計數(shù)也會影響其準確性。環(huán)凱研發(fā)的Smartcounter自動菌落計數(shù)儀廣泛應用于食品飲料、乳制品行業(yè)、醫(yī)院、化妝品、制藥工業(yè)中的微生物實驗室檢測，適用于對微生物的菌落計數(shù)和結果保存記錄和溯源，能夠完成所有的菌落讀數(shù)類型，Smartcounter用戶操作界面簡潔、易用，是現(xiàn)代微生物檢測實驗室先進和高效的菌落計數(shù)器。
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